技術簡介

MicroRNAs（miRNAs）是一類廣 泛存在于真核生物中，長度為～22nt的單鏈小分子非編碼RNA，在轉錄后的基因調控中發揮作用。它們廣 泛參與細胞增殖、凋亡、分化等生理過程。目前研究發現，miRNA能夠發生m6A甲基化修飾，不僅能夠改變其穩定性，而且能改變與靶mRNA的識別及結合能力，調控mRNA降解或翻譯，在各種重大人類疾病中發揮關鍵的調控作用，并具有作為新型臨床分子標志物的潛能。

技術原理

云序生物提供 m6A 甲基化免疫沉淀測序（m6A Methylation Immunoprecipitation Sequencing，簡稱 m6A MeRIP-seq）服務，助力 m6A 修飾研究。 技術原理如下：提取total RNA后，利用small RNA純化試劑盒提純small RNA（包括miRNA）；將m6A RNA甲基化特異性抗體與RNA進行共孵育，抓取有甲基化修飾的片段進行測序；同時需要平行測序一個對照（Input）樣本，對照樣本為未進行IP反應的RNA。對照樣本用于消除非特異性抓取甲基化片段的背景。對比免疫共沉淀IP樣本和Input樣本中的序列片段，將miRNA m6A甲基化修飾位點定位到轉錄組上，并計算樣本中miRNA m6A甲基化程度。

配合專業的生物信息學分析，云序生物可進一步提供高精度的miRNA m6A甲基化圖譜，幫助客戶揭示miRNA m6A甲基化在生物學功能和潛在的作用機制。

云序優勢

一站式服務

客戶只需提供組織、細胞、體液樣品或RNA，云序生物為您完成從miRNA m6A富集，文庫制備，上機測序到數據分析整套服務流程。

抗體富集效率高

MeRIP-seq的富集效率是決定數據質量的關鍵，云序生物MeRIP-seq實驗采用預驗證的商業化抗體和精心優化的實驗流程，具有極高的效率和特異性。

嚴格的質控

云序生物對MeRIP-seq實驗每一步驟均設有關鍵質控，全程監控實驗質量，保證客戶得到優 質數據。

專業的生物信息學分析

云序生物擁有專業的生物信息分析團隊，幫助客戶進行實驗數據的全 面挖掘。

案例解析

案例：成熟microRNA在胃腸道腫 瘤中的甲基化水平

原文：Distinct methylation levels of mature microRNAs in gastrointestinal cancers
期刊：Nature Communication  影響因子：11.878 
大阪大學醫學研究生院和大阪大學醫學研究所，通過對胃腸道ai和ai旁組織進行miRNA MeRIP-seq，發現miRNA在ai組織中的m6A修飾水平明顯提高；并且發現m6A修飾能夠改變miRNA（miR-17-5p, -21-5p, and -200c-3p a和let-7a-5p）的穩定性和對靶mRNA的識別能力；其中發生m6A修飾的miR-17-5p在早期ai癥病人的血漿中具有極高的敏感性和特異性。這些發現不僅為早期ai癥的診斷策略提供了基礎，同時也為我們對miRNA生物學的探究提供了一個新的認識。

圖注：m6A修飾的miR-17-5p可以作為早期ai的診斷標志物

樣品要求

樣品類型

細胞、組織或RNA，其他樣本類型及樣品量請電詢。

樣品量 

a) 細胞：2×10⁷ 

b) 組織：100 mg-1 g

c) RNA：30-300 μg（OD260/280：1.6-2.3；RNA無明顯降解28S:18S>1.5或RIN>7）

樣品運輸與保存

樣品運輸：樣品置于1.5mL離心管中，封口膜封好，干冰運輸。
樣品保存：細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理，液氮凍存后-80℃保存；RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存，避免反復凍融。