技術簡介
MicroRNAs(miRNAs)是一類廣 泛存在于真核生物中,長度為~22nt的單鏈小分子非編碼RNA,在轉錄后的基因調控中發揮作用。它們廣 泛參與細胞增殖、凋亡、分化等生理過程。目前研究發現,miRNA能夠發生m6A甲基化修飾,不僅能夠改變其穩定性,而且能改變與靶mRNA的識別及結合能力,調控mRNA降解或翻譯,在各種重大人類疾病中發揮關鍵的調控作用,并具有作為新型臨床分子標志物的潛能。
技術原理
云序生物提供 m6A 甲基化免疫沉淀測序(m6A Methylation Immunoprecipitation Sequencing,簡稱 m6A MeRIP-seq)服務,助力 m6A 修飾研究。 技術原理如下:提取total RNA后,利用small RNA純化試劑盒提純small RNA(包括miRNA);將m6A RNA甲基化特異性抗體與RNA進行共孵育,抓取有甲基化修飾的片段進行測序;同時需要平行測序一個對照(Input)樣本,對照樣本為未進行IP反應的RNA。對照樣本用于消除非特異性抓取甲基化片段的背景。對比免疫共沉淀IP樣本和Input樣本中的序列片段,將miRNA m6A甲基化修飾位點定位到轉錄組上,并計算樣本中miRNA m6A甲基化程度。
配合專業的生物信息學分析,云序生物可進一步提供高精度的miRNA m6A甲基化圖譜,幫助客戶揭示miRNA m6A甲基化在生物學功能和潛在的作用機制。
云序優勢
一站式服務
客戶只需提供組織、細胞、體液樣品或RNA,云序生物為您完成從miRNA m6A富集,文庫制備,上機測序到數據分析整套服務流程。
抗體富集效率高
MeRIP-seq的富集效率是決定數據質量的關鍵,云序生物MeRIP-seq實驗采用預驗證的商業化抗體和精心優化的實驗流程,具有極高的效率和特異性。
嚴格的質控
云序生物對MeRIP-seq實驗每一步驟均設有關鍵質控,全程監控實驗質量,保證客戶得到優 質數據。
專業的生物信息學分析
云序生物擁有專業的生物信息分析團隊,幫助客戶進行實驗數據的全 面挖掘。
案例解析
案例:成熟microRNA在胃腸道腫 瘤中的甲基化水平
原文:Distinct methylation levels of mature microRNAs in gastrointestinal cancers
期刊:Nature Communication 影響因子:11.878
大阪大學醫學研究生院和大阪大學醫學研究所,通過對胃腸道ai和ai旁組織進行miRNA MeRIP-seq,發現miRNA在ai組織中的m6A修飾水平明顯提高;并且發現m6A修飾能夠改變miRNA(miR-17-5p, -21-5p, and -200c-3p a和let-7a-5p)的穩定性和對靶mRNA的識別能力;其中發生m6A修飾的miR-17-5p在早期ai癥病人的血漿中具有極高的敏感性和特異性。這些發現不僅為早期ai癥的診斷策略提供了基礎,同時也為我們對miRNA生物學的探究提供了一個新的認識。
圖注:m6A修飾的miR-17-5p可以作為早期ai的診斷標志物
樣品要求
樣品類型
細胞、組織或RNA,其他樣本類型及樣品量請電詢。
樣品量
a) 細胞:2×107
b) 組織:100 mg-1 g
c) RNA:30-300 μg(OD260/280:1.6-2.3;RNA無明顯降解28S:18S>1.5或RIN>7)
樣品運輸與保存
樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。
樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。
技術簡介
MicroRNAs(miRNAs)是一類廣 泛存在于真核生物中,長度為~22nt的單鏈小分子非編碼RNA,在轉錄后的基因調控中發揮作用。它們廣 泛參與細胞增殖、凋亡、分化等生理過程。目前研究發現,miRNA能夠發生m6A甲基化修飾,不僅能夠改變其穩定性,而且能改變與靶mRNA的識別及結合能力,調控mRNA降解或翻譯,在各種重大人類疾病中發揮關鍵的調控作用,并具有作為新型臨床分子標志物的潛能。
技術原理
云序生物提供 m6A 甲基化免疫沉淀測序(m6A Methylation Immunoprecipitation Sequencing,簡稱 m6A MeRIP-seq)服務,助力 m6A 修飾研究。 技術原理如下:提取total RNA后,利用small RNA純化試劑盒提純small RNA(包括miRNA);將m6A RNA甲基化特異性抗體與RNA進行共孵育,抓取有甲基化修飾的片段進行測序;同時需要平行測序一個對照(Input)樣本,對照樣本為未進行IP反應的RNA。對照樣本用于消除非特異性抓取甲基化片段的背景。對比免疫共沉淀IP樣本和Input樣本中的序列片段,將miRNA m6A甲基化修飾位點定位到轉錄組上,并計算樣本中miRNA m6A甲基化程度。
配合專業的生物信息學分析,云序生物可進一步提供高精度的miRNA m6A甲基化圖譜,幫助客戶揭示miRNA m6A甲基化在生物學功能和潛在的作用機制。
云序優勢
一站式服務
客戶只需提供組織、細胞、體液樣品或RNA,云序生物為您完成從miRNA m6A富集,文庫制備,上機測序到數據分析整套服務流程。
抗體富集效率高
MeRIP-seq的富集效率是決定數據質量的關鍵,云序生物MeRIP-seq實驗采用預驗證的商業化抗體和精心優化的實驗流程,具有極高的效率和特異性。
嚴格的質控
云序生物對MeRIP-seq實驗每一步驟均設有關鍵質控,全程監控實驗質量,保證客戶得到優 質數據。
專業的生物信息學分析
云序生物擁有專業的生物信息分析團隊,幫助客戶進行實驗數據的全 面挖掘。
案例解析
案例:成熟microRNA在胃腸道腫 瘤中的甲基化水平
原文:Distinct methylation levels of mature microRNAs in gastrointestinal cancers
期刊:Nature Communication 影響因子:11.878
大阪大學醫學研究生院和大阪大學醫學研究所,通過對胃腸道ai和ai旁組織進行miRNA MeRIP-seq,發現miRNA在ai組織中的m6A修飾水平明顯提高;并且發現m6A修飾能夠改變miRNA(miR-17-5p, -21-5p, and -200c-3p a和let-7a-5p)的穩定性和對靶mRNA的識別能力;其中發生m6A修飾的miR-17-5p在早期ai癥病人的血漿中具有極高的敏感性和特異性。這些發現不僅為早期ai癥的診斷策略提供了基礎,同時也為我們對miRNA生物學的探究提供了一個新的認識。
圖注:m6A修飾的miR-17-5p可以作為早期ai的診斷標志物
樣品要求
樣品類型
細胞、組織或RNA,其他樣本類型及樣品量請電詢。
樣品量
a) 細胞:2×107
b) 組織:100 mg-1 g
c) RNA:30-300 μg(OD260/280:1.6-2.3;RNA無明顯降解28S:18S>1.5或RIN>7)
樣品運輸與保存
樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。
樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。
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